Digitale PCR voor EGFR T790M en C797S: volgen van sequentiële resistentie na TKI-therapie

Overzicht

Resistentie tegen EGFR gerichte therapie komt in een voorspelbare volgorde en deze test is gebaseerd op die volgorde.Terwijl C797S verschijnt nadat een derde generatie agent is ingezet tegen T790MDoor beide substituties in één zeer gevoelige reactie aan te pakken, wordt een vage klinische indruk van progressie omgezet in een genaamd ontsnappingsmechanisme.

Hoe het werkt.

Digitale PCR splitst een enkel voorbereid monster in vele duizenden onafhankelijke partities voordat de versterking begint.Dus na het fietsen telt het instrument positieve compartimenten en past het Poisson-statistieken toe om een absoluut molecuulgetal af te leiden zonder verwijzing naar een standaardcurveAllel-specifieke sondes onderscheiden de mutante sequentie van de overvloedige wilde achtergrond.Wat belangrijk is omdat ontsnappingsclonen vaak een klein deel van het circulerende materiaal vertegenwoordigen op het moment dat de progressie klinisch zichtbaar wordt..

Indicaties

De test is geschikt voor patiënten die een EGFR-gerichte behandeling volgen, waarbij het ontsnappingsmechanisme moet worden genoemd voordat de volgende lijn wordt gekozen.en weefsel kan worden gebruikt indien een vers monster verkrijgbaar isHet ondersteunt ook seriële bemonstering over de hele behandeling, aangezien een absolute telling een vergelijking tussen trekken in plaats van een enkele momentopname mogelijk maakt.omdat de afgifte varieert, dus weefselbevestiging blijft geschikt wanneer het klinische beeld niet overeenkomt.

Specificaties en rapportage

Bevestig het vereiste bloedvolume, de detectiegrens uitgedrukt als een mutant allelfractie en het aantal DNA-kopieën per reactie, omdat een lage input de gevoeligheid stilletjes vermindert.In de verslagen moeten naast de fractie ook de absolute aantallen mutanten en wilde soorten worden vermeld., elke vervanging afzonderlijk te benoemen en vast te stellen of de input onder de gevalideerde drempel is gevallen.

Opberging en bevoorrading

Het bloed dat in standaard EDTA-buizen wordt opgenomen, moet binnen een kort vastgestelde tijdspanne worden gescheiden en tijdens het vervoer op 2-8°C worden gehouden.Omdat de leukocyten afbreken, overstroomt het monster met wild-type DNA en begraaft het signaal.De celstabiliserende buizen verlengen dat venster en zijn hun premie waard in verspreide verzamelnetwerken.Schriftelijke koerierschema's en gedocumenteerde intervallen van trek tot scheiding zijn hier belangrijker dan bij elke weefselgebaseerde test..

Veelgestelde vragen

V: Waarom kiezen voor digitale PCR in plaats van een breed sequentiepaneel als er vermoeden bestaat van resistentie?Wanneer de vraag is of er één bekende substitutie aanwezig is, bereikt partitietelling een lagere detectiegrens en keert het sneller terug dan brede sequentie.Kies een breed paneel in plaats daarvan wanneer de ontsnappingsroute is echt onbekend.

V: Wat betekent een C797S bevinding voor de volgende therapie?Het geeft aan dat er ontsnapping is opgetreden op de bindingsplaats waar de derde generatie remmers zich op richten, dus het is onwaarschijnlijk dat doorgaan met hetzelfde middel helpt.Het resultaat dient te worden besproken in het licht van de huidige behandelingsrichtlijnen in plaats van te worden behandeld als een voorschrijfinstructie..

V: Hoe snel moet plasma het laboratorium bereiken om het circulerende DNA bruikbaar te houden?Bij standaard EDTA-opvang wordt het interval van trek tot scheiding gemeten in uren, niet in dagen.Bevestig het aangegeven venster van de aanbieder en valideer uw koerier daartegen voordat u verzamelplaatsen aan de workflow verbindt.